Obstaja veliko načinov za merjenje rasti bakterij, eden pa je bolj zapleten kot drugi. Čeprav je včasih treba zanemariti doslednost merjenja, je najlažji način, da natančno izmerimo rast bakterij, zato se pogosto uporablja. Najpogosteje uporabljene metode so spremljanje in štetje bakterij, merjenje suhe ali mokre mase ter merjenje ravni motnosti/motnosti. Laboratorij vaše šole mora imeti orodja in opremo, potrebne za izvedbo vsaj enega od teh poskusov.
Korak
Metoda 1 od 3: Spremljanje bakterij v živo
Korak 1. Pripravite sestavine
Obstaja veliko posebnih orodij, ki jih je treba pripraviti in morda niso na voljo v biološkem laboratoriju. Pred izvedbo poskusa pripravite vso opremo in posode, da med postopkom ne bo težav. Morali boste poznati vsako sestavino, ki je bila uporabljena takoj, in osnovne pogoje tega poskusa.
- Pripravite štetje komore. Ima vgrajeno komoro, steklo za mikroskop in mikroskop, zato je enostaven za nastavitev in uporabo. Lahko ga kupite v laboratoriju ali šolski trgovini. To orodje mora vsebovati navodila, ki vas vodijo skozi celoten postopek.
- Pripravite skodelico za nalivanje ali razpršeno skodelico. Obe posodi vam omogočata spremljanje bakterij v notranjosti.
- Kultura je izraz, ki opisuje rast organizmov v poskusu.
- Juha je tekoči medij, v katerem raste kultura.
Korak 2. Uporabite metodo vlivanja ali razmazovanja
Bakterije lahko postavite tudi neposredno na posodo za ogled z mikroskopom. Kulturo nalijte na krožnik in jo postavite pod mikroskop. Spremljajte število prisotnih bakterijskih celic.
Korak 3. Prepričajte se, da je koncentracijski odmerek pravilen
Če jih je preveč, se bodo bakterije nakopičile ena na drugo in morda boste napačno izračunali. Kulturo razredčite z mešanjem več juhe. Če jih je premalo, rezultati izračuna ne bodo točni. Juho precedimo s filtrirnim sistemom.
Korak 4. Preštejte bakterije
Zadnji korak je šteti bakterije eno za drugo. Poglejte skozi povečevalno lečo v številski komori in zapišite število bakterij, ki jih vidite. Primerjajte rezultate z rezultati drugih testov.
Metoda 2 od 3: Merjenje suhe in mokre mase
Korak 1. Prepričajte se, da imate pravo opremo
Ta metoda uporablja drago opremo in veliko časa. Če vaš laboratorij nima potrebne opreme, je dobro uporabiti drugo metodo. Če pa je vaš laboratorij dovolj dobro opremljen, priporočamo to metodo, saj zagotavlja doslednejše rezultate. Pri tej metodi boste potrebovali:
- Hidravlična gravitacijska konvekcijska pečica
- Posoda za tehtanje iz aluminija
- Komplet bučk (laboratorijske steklenice)
- Centrifugalni stroj (centrifuga) ali laboratorijski sistem za filtriranje
Korak 2. Prepričajte se, da je kultura v bučki
Buči dodamo kulturo. Na tej stopnji bi morala biti kultura juha, čeprav jo bodo kasneje spet ločili.
Korak 3. Aluminijsko tehtalno posodo posušite v laboratorijski pečici
Namesto tega lahko uporabite filtrirno membrano iz celuloznega acetata s premerom 47 mm in velikostjo por 0,45 µm. Ne glede na to, katero posodo za tehtanje uporabljate, jo tehtajte, saj jo boste morali pozneje odšteti pri tehtanju bakterijskih celic.
Korak 4. Kulturo v bučki mešamo, dokler se enakomerno ne premeša
Celica bo zaradi gravitacije naravno potonila in jo bo treba mešati, da se enakomerno razporedi po bučki. Tako lahko dobite več vzorcev.
Korak 5. S centrifugo ločite bakterijske celice od juhe
To orodje vrti bučko in se hitro uravnovesi, tako da odteče juho in pusti kulturo v bučki.
Korak 6. S bučke odstranite pasto in jo položite v posodo za tehtanje
Odstranite juho, ker je ne potrebujete več. Vendar se buče še ne znebite, ker se bo še vedno uporabljala.
Korak 7. Izperite centrifugalni stroj in vlijte vodo za izpiranje v posodo
V bučko spustite vodo za izpiranje na bakterijske celice, da dobite mokro težo.
Korak 8. Poiščite suho težo
Za merjenje suhe teže posodo postavite v pečico in sušite pri 100 ° C 6-24 ur v skladu z navodili iz pečice in/ali posode za tehtanje. Prepričajte se, da temperatura ni previsoka, da bakterije ne izgorijo. Ko ste končali, stehtajte bakterije in ne pozabite zmanjšati rezultata za težo posode za tehtanje.
Metoda 3 od 3: Merjenje motnosti
Korak 1. Pripravite potrebno opremo
Potrebovali boste vir svetlobe in spektrofotometer. Oboje je mogoče kupiti v trgovinah z laboratorijskimi potrebščinami. Spektrofotometer mora vsebovati navodila, ki vas bodo vodila pri uporabi instrumenta glede na model, ki ga imate. Cena spektrofotometra je precej dostopna in enostavna za uporabo, zato lahko postane ena najpogosteje uporabljenih metod za merjenje rasti bakterij.
Korak 2. Osvetlite vzorec
Po Laymanovem izrazu je motnost stopnja motnosti vzorca. Morate dobiti številko merjenja motnosti, ki se meri v NTU (enota nefelometrične motnosti). To orodje je treba kalibrirati, preden lahko natančno izmeri vzorec.
Korak 3. Zapišite rezultate
Na motnost vpliva število bakterij v vzorcu. Spektrofotometer vam bo povedal tudi odstotek prenosa (%T). Ta številka se bo povečala, če se bo motnost zmanjšala. Primerjajte rezultate z rezultati drugih testov za merjenje rasti bakterij.
Opozorilo
- Ker imate opravka z bakterijsko kolonijo, bodite previdni in nosite varnostno opremo, kot so zaščitna očala in rokavice. Prav tako je dobro nositi masko, še posebej, če ne poznate vrste bakterij, ki jih preučujete.
- Pred ravnanjem s kakršno koli bakterijo, tudi neškodljivo, upoštevajte varnostne ukrepe. Preden začnete, se prepričajte, da so vse odprte rane na telesu popolnoma pokrite.
