V kemiji je redčenje postopek zmanjševanja koncentracije snovi v raztopini. Verižno redčenje je ponavljajoče se redčenje raztopine za hitro povečanje faktorja redčenja. Ta postopek se običajno izvaja v poskusih, ki zahtevajo zelo razredčene raztopine z visoko natančnostjo. Na primer poskusi, ki vključujejo krivulje koncentracije na logaritemski lestvici ali poskusi za določanje gostote bakterij. Verižne razredčitve se pogosto uporabljajo v znanstvenih poskusih, kot so biokemija, mikrobiologija, farmakologija in fizika.
Korak
Metoda 1 od 2: Izvajanje osnovne razredčitve
Korak 1. Določite ustrezno raztopino razredčila
Zelo pomembno je določiti tekočino, ki jo bomo uporabili za redčenje. Veliko raztopin je topnih v destilirani vodi, vendar to ni vedno tako. Če redčite bakterije ali druge celice, to storite na gojišču. Izbrana tekočina bo uporabljena za vsa razredčenja verig.
Če ste v dvomih, katero razredčilo uporabiti, poiščite pomoč ali poiščite na spletu. Poiščite primere drugih, ki so naredili podobne razredčitve verig
Korak 2. Pripravite številne epruvete, ki vsebujejo 9 ml razredčila
Za prazne razredčitve se uporabljajo epruvete. Najprej dajte nerazredčen vzorec v prvo epruveto, nato razredčite zaporedoma v naslednje epruvete.
- Pred začetkom redčenja označite vse uporabljene epruvete, da se ne boste zmotili, ko bo poskus potekal.
- Vsaka epruveta bo napolnjena z 10 razredčitvami, začenši s cevko, katere snov ni bila razredčena. Razredčenje v prvi epruveti je 1:10, sledi 1: 100 v drugi epruveti, 1: 1000 v tretji itd. Določite količino redčenja, ki jo je treba izvesti vnaprej, da ne zapravite raztopine razredčila.
Korak 3. Pripravite epruveto, ki vsebuje vsaj 2 ml nerazredčene raztopine
Najmanjša količina raztopine, ki jo je treba razredčiti za to verižno redčenje, je 1 ml. Če uporabite samo 1 ml, ne ostane nerazredčene raztopine. Označite BLM za nerazredčene raztopine.
Pred začetkom redčenja raztopino temeljito premešajte
Korak 4. Izvedite prvo redčenje
S pipeto vzemite 1 ml nerazredčene raztopine iz epruvete BLM in jo dajte v epruveto z oznako 1:10, ki vsebuje 9 ml vehikla, nato pa dobro premešajte. Zdaj je v 9 ml razredčila 1 ml nerazredčene raztopine. Tako je bila raztopina razredčena s faktorjem redčenja 10.
Korak 5. Izvedite drugo redčenje
Za drugo redčenje vzemite 1 ml raztopine iz epruvete 1:10, nato pa jo vstavite v epruveto 1: 100, ki vsebuje tudi 9 ml razredčila. Prepričajte se, da je raztopina v cevi 1:10 popolnoma premešana, preden jo dodate v naslednjo epruveto. Še enkrat se prepričajte, da je razredčenje v epruveti 1: 100 popolnoma premešano. Raztopino iz cevi 1:10 smo 10-krat razredčili v epruveti 1: 100.
Korak 6. Nadaljujte s tem postopkom za daljša redčenja verige
Ta postopek lahko ponovimo tolikokrat, kolikor je potrebno, da dobimo želeno koncentracijo raztopine. V poskusih z uporabo krivulj koncentracije lahko izvedete razredčitev verige, da dobite številne raztopine z razredčitvijo 1, 1:10, 1: 100, 1: 1.000.
Metoda 2 od 2: Izračun faktorja redčenja in končne koncentracije
Korak 1. Izračunajte razmerje zadnjega redčenja v razredčitvi verige
Skupno razmerje redčenja je mogoče določiti z množenjem faktorja redčenja od vsakega koraka do zadnjega. Matematična ilustracija je s formulo Dt = D1 x D2 x D3 x… x D , Dt je skupni faktor redčenja in D je razmerje razredčila.
- Recimo, da razredčite 1:10 4 -krat. Faktor razredčila vključite v formulo: Dt = 10 x 10 x 10 x 10 = 10.000
- Faktor razredčila v četrti epruveti v tej verižni razredčitvi je 1: 10.000. Koncentracija snovi po razredčitvi je 10.000 krat manjša kot pred razredčitvijo.
Korak 2. Določite koncentracijo raztopine po razredčitvi
Za določitev končne koncentracije raztopine po razredčitvi verige morate poznati njeno začetno koncentracijo. Formula je C.konec = Czačetek/D, Ckonec je končna koncentracija razredčene raztopine, Czačetek je začetna koncentracija prvotne raztopine in D je vnaprej določeno razmerje redčenja.
- Na primer: Če začnete z raztopino celic, katere koncentracija je 1.000.000 celic na ml, razmerje redčenja pa 1.000, kakšna je končna koncentracija razredčenega vzorca?
-
Z uporabo formule:
- Ckonec = Czačetek/D
- Ckonec = 1.000.000/1.000
- Ckonec = 1000 celic na ml.
Korak 3. Prepričajte se, da so vse enote enake
Pri kakršnem koli izračunu se prepričajte, da so enote na koncu izračuna vedno enake. Če je začetna enota celic na ml, se prepričajte, da ostanejo enote na koncu izračuna enake. Če je začetna koncentracija delež na milijon (bpd), mora biti tudi končna koncentracija v enotah bpj.
